Blodtest for tms hvad er det

Kostvaner

Tandemmassespektrometri (TMS) er en af ​​de moderne metoder til analyse af forbindelser, som i vid udstrækning anvendes til forskellige videnskabelige og praktiske formål. Denne metode tillader analyse af flere hundrede forbindelser i spormængder af biologisk materiale.

Hvor gælder denne metode?

I verdenspraksis med folkesundhed anvendes denne metode til at gennemføre massescreening af nyfødte til arvelige metaboliske sygdomme (NBO). I stedet for tørret blod er bestemmelsen af ​​aminosyrer (herunder phenylalanin) og acylcarnitiner mulig. Kvantitativ bestemmelse af disse stoffer gør det muligt at udelukke flere dusin arvelige sygdomme, der tilhører forskellige klasser af NBO (forstyrrelser i aminosyrer, organiske syrer og mangler i mitokondriel β-oxidation af fedtsyrer). Ifølge udenlandske litteraturdata er deres samlede frekvens 1: 2000 levende nyfødte. Tidligere krævede diagnosen af ​​disse lidelser en stor mængde biologisk materiale, flere undersøgelser (aminosyreanalyse, gaskromatografi / massespektrometri, bestemmelse af spektret af acylcarnitiner), hvilket krævede betydelige omkostninger til tid og materiale. TMS giver dig mulighed for at kvantificere alle disse forbindelser i en analyse!

Hvilke sygdomme kan detekteres ved hjælp af denne metode?

Desværre eksisterer der ikke en universel højfølsom og specifik test til diagnosticering af alle kendte NBO'er endnu, men teknologier, der sigter mod at identificere flere snesevis og endda hundredvis af sygdomme i en analyse, er allerede ved at blive en realitet. Disse metoder omfatter TMS. Denne metode tillader med stor tillid at opdage omkring 40 arvelige metaboliske lidelser af aminosyrer, organiske syrer og defekter af mitokondriell beta-oxidation af fedtsyrer. De fleste af disse sygdomme opstår i nyfødtperioden. Listen over sygdomme, der kan diagnosticeres ved hjælp af denne teknologi, findes i analysesektionen http://labnbo.ru/prajs-list

Hvorfor er det nødvendigt at diagnosticere metaboliske sygdomme så tidligt som muligt?

Mange læger tror fejlagtigt, at NBO er så sjældne, at de kun skal udelukkes sidst, og meget ofte er den korrekte diagnose allerede etableret i de senere stadier, eller sygdommen er slet ikke diagnosticeret.

Imidlertid er der allerede kendt over 150 former for NBO'er, for hvilke effektive terapimetoder der er udviklet, og patientens liv og sundhed afhænger i vid udstrækning af, hvor hurtigt og korrekt en diagnose er foretaget. For 20 sygdomme, der kan diagnosticeres ved hjælp af TMS, er der udviklet en særlig behandling. Diagnostiseret i tide - reddet patientens liv og sundhed!

Regler for indsamling af blodprøver

Blodet opsamles på et standardfilterkort (№903), som bruges til screening af nyfødte til PKU. Blod kan være enten kapillært (med en finger, hæl) eller venøs. Det er nødvendigt at mætte det valgte område godt på filteret! Filterkortet skal tydeligt angive navnet, af hvem og hvorfra patienten, fødselsdato og telefonnummer til den behandlende læge blev sendt. Prøven tørres i 2-3 timer i luften. Det er tilrådeligt at vedhæfte et uddrag fra historien.

Et eksempel på korrekt blodindsamling:

Eksempler på unormal blodprøveudtagning:

Mange små pletter

Prøven blev ikke fuldstændigt tørret, hvilket resulterede i, at en prøve blev sløret under transport.

Filterpapiret blev dårligt gennemblødt i blod.

Nyttige links:

(NCBI) er en nationalt molekylærbiologi informationsressource grundlagt i 1988. PubMed databasen indeholder mere end 15.000.000 artikler fra forskellige biomedicinske tidsskrifter (på engelsk).

Et katalog over humane gener og genetiske sygdomme, skabt af Dr. V.A. McKusick og hans kolleger (på engelsk).

(SSIEM) - Samfund for undersøgelsen af ​​arvelige metaboliske sygdomme (medfødte metaboliske fejl).

Federal State Budget Scientific Institution "Medical Genetics Research Center"

Informationsportal om sjældne sygdomme, mulighederne for behandling og diagnose hos patienter med sjældne sygdomme

Det All-Russian Society of Rare Diseases blev oprettet i 2012 på initiativ af patienter, deres familier og eksperter. I dag forener WHO-organisationen mere end 400 patienter fra 47 regioner i Den Russiske Føderation med 63 sjældne sygdomme.

Blodtest for tms hvad er det

I mange år har screening hovedsageligt været udført med tests, der er specifikke for hver enkelt sygdom. For eksempel var screeningen af ​​PKU baseret på en mikrobiologisk eller kemisk evaluering af stigningen i phenylalanin.

Denne situation er helt ændret i løbet af det sidste årti med fremkomsten af ​​tandem massespektrometri (TMS) teknologi. Analyse af tandem-massespektrometri (TMS) kan ikke kun præcist og hurtigt at påvise forhøjede phenylalanin blod plet i nyfødte med færre falske positive reaktioner sammenlignet med ældre metoder, men også gør det muligt at detektere samtidigt flere dusin andre biokemiske lidelser.

Nogle af dem er allerede blevet screenet med individuelle tests. For eksempel har mange stater anvendes specifikke tests til påvisning af forøget methionin, til påvisning af tandem massespektrometri (TMS) var også nogen pålidelig fremgangsmåde til screening-onatalnogo visse sygdomme relevante udvælgelseskriterier men havde ingen pålidelig test tidligere.

For eksempel er MCAD-mangel en sygdom med fedtsyreoxidation, sædvanligvis asymptomatisk, men klinisk detekterbar, når en patient forøger katabolisme. Detektering af MCAD-mangel ved fødslen kan være afgørende, da syge børn har en meget høj risiko for livstruende hypoglykæmi i tidlig barndom med kataboliske tilstande forårsaget af sammenfaldende sygdomme, såsom en viral infektion.

Næsten en fjerdedel af børn med udiagnosticeret MCAD-mangel dør ved den første episode af hypoglykæmi. Ved korrekt behandling kan stofskiftet stoppes. MCAD-mangel, når det primære formål med screening - warning forældre og læger om risikoen for metabolisk dekompensation, som børn mellem anfald af næsten rask og ikke har brug for daglig behandling, bortset fra undtagelser længerevarende faste.

Imidlertid er anvendelsen af ​​tandemmassespektrometri (TMS) til neonatal screening fortsat relevant. Ud over at give hurtig test af mange lidelser, neonatal screening for hvilke der allerede er gjort eller kan begrundes, tandem massespektrometri (TMS) identificerer også spædbørn med medfødte stofskiftesygdomme såsom methylmalonsyresænkende acidæmi, er normalt ikke inkluderet i screeningsprogrammet på grund af deres sjældenhed og det er vanskeligt at give en endelig terapi, som beskytter mod progressiv neurologisk forringelse.

Sygdomme opdaget ved tandem massespektrometri

I. Aminoacidæmi:
- PKU
- Sygdom af urin med ahornsirup
- homocystinuri
- Tsitrullinemiya
- Arginin sukkerholdig sururia
- Tyrosinæmi type I

II. Økologisk acidæmi:
- Propionsyre
- Methylmalonsyreæmi
- Isovalerisk Acidæmi
- Isoleret 3-methyl-crotonyl-glycinæmi
- Glutarsyreæmi (type I)
- Mitokondriell acetoacetyl-coA-thiolase mangel
- Hydroxymethylglutaric acidemia
- Manglen på mange coA-carboxylase

III. Overtrædelser af fedtsyreoxidation:
- SCAD-fejl
- Hydroxy deficiency scad
- MCAD fiasko
- VLCAD-fejl
- LCAD-mangel og trifunktionel proteinmangel
- Glutarsyreæmi type II
- Carnitin palmitoyltransferase II mangel

Tandem massespektrometri (TMS) kan også identificere unormale metabolitter med en ubestemt sundhedsværdi. For eksempel er SCAD-mangel en anden fedtsyreoxidationssygdom, oftest asymptomatisk, selvom nogle patienter kan have svært ved episodisk hypoglykæmi. Den prediktive værdi af en positiv tandemmassespektrometrianalyse (TMS) for symptomatisk SCAD er således sandsynligvis meget lav.

Fordelen ved at detektere SCAD-mangel opvejer den negative effekt af testen, hvilket forårsager uberettiget forældreangst, for de fleste nyfødte med et positivt testresultat, der aldrig viste kliniske symptomer? Således opfylder ikke alle sygdomme, der opdages ved tandemmassespektrometri (TMS) kriterierne for neonatal screening.

Derfor hævder nogle eksperter i sundhedsvæsenet, at forældre og læger kun skal fortælle om afvigelser i metabolitter med dokumenterede kliniske fordele. Andre fortaler brugen af ​​alle de oplysninger, som tandem massespektrometri (TMS), og tilbud om at informere læger og forældre alle unormale metabolitter, uanset hvor gode de kriterier, sygdom svarer til standard neonatal screening. I fremtiden kan du omhyggeligt overvåge patienter med uregelmæssigheder af ukendt værdi. Af alle disse grunde er anvendelsen af ​​tandemmassespektrometri (TMS) til screening af nyfødte fortsat genstand for debat.

For population screening i prenatalperioden anvendes to test normalt: kromosomalanalyse hos ældre kvinder og AFP-mors serum eller en tredobbelt test for DNT og kromosomal aneuploidi.

Hvis graviditeten er i fare på grund i - invasive procedurer for prænatal diagnose af kromosomale aneuploidiseringer grundet moderens alder, bør også tilbyde yderligere inspektion, fx bestemmelse af AFP-niveauer i fostervand, at genom-komparativ hybridisering søge efter farlige submikroskopiske sletninger, mutationer screening for cystisk fibrose og andre almindelige lidelser.

Blodtest for tms hvad er det

Tandemmassespektrometri er en af ​​de moderne metoder til analyse af forbindelser, som i vid udstrækning anvendes til forskellige videnskabelige og praktiske formål. Denne metode tillader analyse af flere hundrede forbindelser i spormængder af biologisk materiale. I verdenspraksis med folkesundhed anvendes denne metode til massescreening af nyfødte til arvelige metaboliske sygdomme (NBO). I stedet for tørret blod er bestemmelsen af ​​aminosyrer (herunder phenylalanin) og acylcarnitiner mulig. Kvantitativ bestemmelse af disse stoffer gør det muligt at udelukke flere dusin arvelige sygdomme, der tilhører forskellige klasser af NBO (forstyrrelser i aminosyrer, organiske syrer og mangler i mitokondriel b-oxidation af fedtsyrer). Tidligere krævede diagnosen af ​​disse lidelser en stor mængde biologisk materiale, flere undersøgelser (aminosyreanalyse, gaskromatografi / massespektrometri, bestemmelse af spektret af acylcarnitiner), hvilket krævede betydelige omkostninger til tid og materiale. TMS giver dig mulighed for at kvantificere alle disse forbindelser i en analyse! Arvelige lidelser i metabolisme af aminosyrer, organiske syrer og defekter af mitokondrielle beta-oxidation af fedtsyrer omfatter ca. 100 nosologiske former, hvoraf de fleste manifesterer sig i nyfødtperioden. Deres hyppighed er mere end 1: 5000 levende nyfødte. Mange læger tror fejlagtigt, at sygdomme i denne gruppe er så sjældne, at de kun skal udelukkes sidst, og meget ofte er den korrekte diagnose allerede etableret i de senere stadier, eller sygdommen er slet ikke diagnosticeret.

Under analysen bestemmes 52 indikatorer (aminosyrer og acylkarniner)

Testmateriale: kapillært blod i tør form

Forberedelse til undersøgelsen: nej

Modtagelsesdage: I åbningstiden for lægehuset

№ НБО1, Screening af nyfødte. "PINGULUS" (analyse af spektret af aminosyrer og acylcarnitiner)

  • Lignende tilfælde af sygdom i familien.
  • Tilfælde af et barns pludselige død i en tidlig alder i familien.
  • En kraftig forringelse af barnets tilstand efter en kort periode med normal udvikling (en asymptomatisk periode kan variere fra flere timer til flere uger).
  • Usædvanlig krop og / eller urin lugt ("sød", "mus", "kogt kål", "svedige ben" osv.).
  • Neurologiske lidelser - lidelser i bevidsthed (letargi, koma), forskellige typer af konvulsive anfald, ændringer i muskeltonen (muskelhypotoni eller spastisk tetraparese).
  • Disorders of respiratory rhythm (bradypnea, tachypnea, apnø).
  • Forstyrrelser fra andre organer og systemer (leverskader, hepatosplenomegali, kardiomyopati, retinopati).
  • Ændringer i laboratorieparametre for blod og urin - neutropeni, anæmi, metabolisk acidose / alkalose, hypoglykæmi / hyperglykæmi, øget aktivitet af leverenzymer og niveauet af kreatinphosphokinase, ketonuri.
  • Yderligere diagnosticering af 37 arvelige metaboliske sygdomme sammen med det obligatoriske statsprogram til påvisning af 5 arvelige sygdomme: screening af nyfødte: "PECHET".

Fortolkning af forskningsresultater indeholder oplysninger til den behandlende læge og er ikke en diagnose. Oplysningerne i dette afsnit kan ikke bruges til selvdiagnose og selvbehandling. En nøjagtig diagnose foretages af lægen ved hjælp af både resultaterne af denne undersøgelse og de nødvendige oplysninger fra andre kilder: anamnese, resultater af andre undersøgelser mv.

Måleenheder i laboratoriet INVITRO: μmol / liter.

LABORATORIUM AF HEREDITÆRE SJÆDESTOFFER

Indikationer for analysen af ​​TMS

Den kliniske diagnose af medfødte metaboliske sygdomme hos aminosyrer, organiske syrer og defekter af mitokondriel b-oxidation kan være svært, da disse sygdomme ikke har specifikke tegn og symptomer. Det er derfor, at undersøgelsen af ​​alle patienter i patologierne for nyfødte, børneintensive enheder kan hjælpe med hurtig opdagelse af disse arvelige sygdomme.

Indikationerne for undersøgelsen af ​​acylcarnitiner og aminosyrer ved TMS-metoden er:


7. Ændringer i blod- og urinparametre - trombocytopeni, neutropeni, anæmi, metabolisk acidose / alkalose, hypoglykæmi / hyperglykæmi, forøgede leverenzymer og kreatinphosphokinase niveauer, ketonuri.

Genetiske analyser

Piger, neuropatologen henviste os til genetik (hun sagde, at cerebral parese er ikke vores diagnose, selv om hun tog alligevel behandling til sanatoriet). Fortæl mig, hvem kom over dette, hvor meget er der ca. Jeg ved stadig ikke, hvad vi vil blive sendt til, men jeg vil gerne vide, hvilke beløb der skal forberede sig på, det er ikke en generel blodprøve...

Mobil applikation "Happy Mama" 4.7 Kommunikation i ansøgningen er meget mere praktisk!

Jeg kan ikke sige. alt kan være. og alt er anderledes

Vi gav en masse ting! Karyotype 4000 rubler, TMS 4000 rubler, urinaminosyrer 4 gange (10.000 rubler for alle), blodaminosyrer 4 gange også ca. 10.000 rubler, Draves syndrom 12.000 rubler, laktat mange gange, konsultationer selv er ikke billige genetik og mange flere " trivia. "Genetisk screening er ikke billigt!

Multi-steroid blodprøve: Definition af vitale humane hormoner på et kvalitativt nyt niveau

Udtrykket "multi-steroidanalyse" refererer til bestemmelsen af ​​profilen af ​​steroidhormoner ved gaskromatografi-massespektrometri. Totaliteten af ​​resultaterne af denne analyse er betegnet med udtrykket "steroidprofil". I det væsentlige er disse to tilsvarende udtryk for det samme.

Multisteroidanalyse er en indenlandsk udvikling, analysemetoden er valideret og certificeret som "Metode" til måling af massekoncentrationen af ​​steroidhormoner i blodprøver ved anvendelse af væskekromatografi - tandemmassespektrometri. MU 08-47 / 376 ", der er registreret i ROSSTANDART-registret under RF-nummeret.1.31.2015.21875.

I øjeblikket er ikke multi-steroidanalyse inkluderet i listen over prøver, der er godkendt af Den Russiske Føderations ministerium for sundhed, og udføres som led i en videnskabelig undersøgelse. Patienterne skal selv betale omkostningerne ved denne analyse. Der arbejdes på at sikre, at disse udgifter i fremtiden er dækket af forsikringsmedicin.

Kvantitativ bestemmelse af de vigtigste steroidhormoner og deres metabolitter i serum eller spytvæske ved referencemetoden - tandemkromatografi-massespektrometri (i den videnskabelige litteratur er denne metode også kaldet LC-MS / MS) en tidskrævende og dyr procedure. Nøglefunktionen ved fremgangsmåden er evnen til at bestemme alle de deklarerede analytter i løbet af en enkelt analyse (figur 1), og derfor i forhold til en analyt, opnås omkostningerne ved bestemmelse næsten mindre end ved alternative immunokemiske metoder.

Figur 1. Analyser bestemt i løbet af en enkelt analyse ifølge metoden

Hvorfor hedder biomaterialet "blod" i teknikkens navn?

For straks at identificere forskellen fra den velkendte analyse "steroid urinprofil". Det skal bemærkes, at informationsindholdet i urinanalysen er helt anderledes og kræver en anden fortolkning, da urinen indeholder for det meste inaktive former for steroider: sulfater, glucuronider og hydroxylerede derivater, der allerede er unødvendige for kroppen og afledt af det. I blodet indgår koncentrationerne af aktive former for steroidhormoner, der cirkulerer i det generelle blodforsyningssystem, ind i cellerne og har en signalvirkning på genomet bestemmes.

Under hvilke medicinske forhold er bestemmelsen af ​​den viste steroidblodprofil, hvilke læger vil steroidblodprofilen hjælpe med diagnosen?

1. Forskellige former for medfødt dysfunktion af binyrebarken (VDCN). VDCH er en medfødt sygdom, manifesteret i strid med biosyntesen af ​​steroider. Det skyldes dysfunktion af et af de 5 enzymer i binyrebarken. Dette kan være en mangel på 21a-hydroxylase (CYP21) eller 11b-hydroxylase (CYP11B1). Traditionel screening af nyfødte til HBRA ved immunoassay giver ofte falske positive resultater ved bestemmelse af 17-hydroxyprogesteron. Derfor er der i alle tvistelige tilfælde behov for bekræftende diagnostik ved LC-MS / MS-metoden [1]. Diagnostisering af en ikke-klassisk form VDKN (NF VDKN) ved immunokemiske metoder er en betydelig vanskelighed, derfor diagnostiseres NF VDKN ofte ikke under neonatal screening, men føles følgelig som konsekvens: unge udvikler for tidlig kropshår, akne; hos piger, hirsutisme, menstruationsdysfunktion og reproduktive lidelser. En stigning i 21-deoxycortisol og 17-OH-progesteron er karakteristisk for steroidprofilen i NF VDKN; derfor er en multi-steroidanalyse kombineret med genetisk test ekstremt nyttig til diagnosticering af denne sygdom.

2. Adrenal insufficiens. Til dette udføres en stimuleringstest med ACTH, og niveauer af cortisol, aldosteron og 11-deoxycortisol måles: Basal, 30 og 60 minutter efter stimulation. I primær binyreinsufficiens responderer aldosteron ikke på stimulering, mens der i sekundær insufficiens registreres en stigning i niveauet. I kontrolgruppen steg niveauet af 11-deoxycortisol 15-20 gange som reaktion på stimulering af ACTH, og kortisol steg ca. 3 gange [2].

3. Hypogonadisme hos mænd. Korrekt diagnose af hypogonadisme hos mænd kræver bestemmelse af det eksakte niveau af total testosteron (TT) ved anvendelse af massespektrometri. I en undersøgelse af 10.000 frivillige blev det konstateret, at hypogonadisme kan diagnosticeres, hvis TT-koncentrationen er under 12,1 nmol / l ifølge massespektrometri [3].

4. Kontrol af substitutionsbehandling hos mænd og kvinder (HRT). For denne kategori af patienter er massespektrometri den "guldstandard", fordi den giver dig mulighed for at vælge den korrekte terapeutiske dosis af hormonet (eller stimulanten), følg detaljeret responsen af ​​alle metabolitter til erstatningsterapi og undgå interferens med immunokemiske metoder [4-6].

5. Det er meget vigtigt at overvåge niveauerne af steroidhormoner under graviditet og i et år efter fødslen. Multi-steroidanalyse giver meget mere præcise oplysninger om androgenstatus sammenlignet med traditionelt DHEA-sulfat.

6. Gynækologi. Viriliserende (androgenproducerende) tumorer i binyrerne besidder androgenproducerende aktivitet og forårsager udviklingen af ​​virussyndrom hos kvinder. Det er blevet fastslået, at praktisk taget enhver hormonelt aktiv æggestokkum kan være en kilde til overdreven produktion af androgener og / eller østrogener og skal diagnosticeres ved hjælp af tandemmassespektrometrimetoden [7].

7. Diabetes. Denne sygdom påvirker nervesystemet og påvirker koncentrationen af ​​neurosteroider. LC-MS / MS gør det muligt at bestemme koncentrationen af ​​neuroaktive steroider for at udvikle nye tilgange til behandling af diabetisk nefropati [8].

8. Sportsmedicin. Steroidprofilen hos atleter i blodet og i spyt kan give vigtige oplysninger om deres sundhed, fitness og styre træningsforløbet på grund af den optimale fordeling af belastninger.

Multi-steroidanalyse gør det svært at gøre et sted for sig selv i livet under hensyntagen til den udbredt anvendelse af immunanalysemetoder og modstand fra tilhængere af traditionelle teknologier. Men bag denne metode er fremtiden, det er allerede anerkendt som de bedste repræsentanter for medicinsk videnskab [9].

Hvad er ALS

Amyotrofisk lateralsklerose er den mest almindelige form for motor neuron sygdom, som er en neurodegenerativ sygdom, der påvirker motoriske neuroner i hjernen og rygmarven.

Diagnose af ALS

Symptomerne på ALS kan variere fra person til person, da sygdommen har en individuel karakter og progressionshastigheden.

Amyotrofisk lateralsklerose er ekstremt vanskelig at diagnosticere af flere grunde:

  • dette er en sjælden sygdom;
  • Tidlige symptomer er ret milde, såsom klodsethed, akavet i hænderne eller en lidt træt tale, som alle kan skyldes helt forskellige grunde;
  • sygdommen påvirker hver person på forskellige måder; der er ingen bestemt symptom, der klart definerer ALS.

Hvis terapeuten har mistanke om, at han eller hun har en ALS patient, skal han henvise ham til en neurolog. Derefter kan en person have en række diagnostiske undersøgelser, der kan udføres både på poliklinisk basis og hos patienten.

Blodprøve

Undersøgelser vil vise, om kreatinkinase niveauer er forhøjet i blodet. Dette enzym produceres, når muskelvæv er ødelagt, og dets niveau kan øges hos mennesker med ALS. Men denne indikator er ikke et specifikt tegn på ALS, da det kan være en indikator for andre sygdomme.

Electroneuromyography (ENMG)

Med ENMG bruges tynde nåle til at registrere nerveimpulser i individuelle muskler. Optagelse er normalt lavet af hver lemmer og bulbar (pharyngeal) muskler. Muskler, der har mistet deres innervering, findes, fordi deres elektriske aktivitet er forskellig fra aktiviteten af ​​sunde muskler. Resultaterne af ENMG kan afvige fra normen, selvom en bestemt muskel endnu ikke er påvirket af sygdommen.

Når ENMG kontrollerer impulsens hastighed langs nervefibrene. For at gøre dette gennemføres en lille impuls gennem en lille pakning i kontakt med huden. Dette er en meget vigtig diagnostisk metode til forskning.

Transcranial Magnetic Stimulation (TMS)

Dette er en ny metode, der kan udføres samtidigt med ENMG. Det er designet til at vurdere tilstanden af ​​motorens neuroner i hjernen. TMS-resultater kan hjælpe med at foretage en diagnose.

Magnetisk Resonans Imaging (MRI)

MRT kan detektere skade på nervesystemet forårsaget af slagtilfælde, Alzheimers sygdom, Parkinsons sygdom, multipel sklerose, tumorer og rygmarv i rygmarven og hjernen. MRT afslører ikke specifikke ændringer i ALS, da skaden forårsaget af denne sygdom ikke påvirker billederne. Denne forskningsmetode bruges til at udelukke sygdomme med ALS-lignende symptomer.

Andre metoder

Neurologen kan beslutte at foretage yderligere undersøgelser som lændepinden eller muskelbiopsi, hvis noget angiver deres behov. Men disse tests anvendes ikke altid ved diagnosen ALS.

Tandem ansøgning
massespektrometri (HPLC-MSMS)
i klinisk diagnose

Massespektrometri er udsigten til udviklingen af ​​klinisk kemi, fremtiden, hvor en revolution i klinisk diagnostik vil føre til udbredt anvendelse af massespektrometri.
(Michael Ulerich, Institut for Klinisk Kemi, Georg-August Universitet, Göttingen, Tyskland)

Ifølge en gennemgang offentliggjort i kliniske biokemiske vurderinger er brugen af ​​højtryksvæskekromatografi kombineret med tandemmassespektrometri (HPLC-MS / MS) i kliniske laboratorier øget enormt i løbet af de sidste 10-12 år. Forfatterne bemærker, at specificiteten af ​​HPLC-MS / MS-analysen er signifikant bedre end immunologiske metoder og klassisk højtydende væskekromatografi (HPLC) ved analysen af ​​molekyler med lav molekylvægt og har en signifikant højere ydeevne end gaskromatografi-massespektrometri (GC-MS). Populariteten af ​​denne metode i rutinemæssige kliniske analyser forklares for tiden af ​​metodenes unikke muligheder.

    De vigtigste fordele ved HPLC-MS / MS-metoden er:

  • Muligheden for nøjagtig kvantitativ analyse af små molekyler;
  • Samtidig analyse af flere målforbindelser;
  • Unikke specificitet
  • High speed analyse.
  • I de senere år er der blevet lagt stor vægt på analysetiden og dermed en stigning i laboratorieproduktiviteten. En signifikant reduktion i analysetiden blev muliggjort ved anvendelse af korte analytiske søjler til HPLC / MS / MS, samtidig med at analysens specificitet øget kraftigt. Anvendelsen af ​​metoden til ionisering ved atmosfærisk tryk (API), tandem triple quadrupole massespektrometer og avanceret højtryksvæskekromatografi samt passende metoder til prøvepræparation førte HPLC-MS / MS til forkant med moderne analytiske metoder til kliniske undersøgelser.

      De vigtigste anvendelsesområder for HPLC / MS / MS i klinisk medicin er:

  • Opnåelse af en fuldstændig metabolismeprofil af steroider (steroider paneler), puriner og pyrimidiner og andre forbindelser,
    screening af nyfødte til medfødte metaboliske fejl (identifikation af flere dusin sygdomme i en analyse);
  • Terapeutisk overvågning af medicin - immunosuppressive midler, perivosudorozhnyh, antiretrovirale midler, antikoagulantia og alle andre - uanset tilstedeværelsen af ​​producentens kits. Du behøver ikke købe dyre kits til hvert stof - du kan udvikle dine egne metoder;
  • Klinisk toksikologi - analyse af mere end 500 narkotiske forbindelser og deres metabolitter i en analyse uden bekræftende analyse
    proteomics og metabolomics.
  • Derudover anvendes HPLC-MSMS til screening af urinoligosaccharider, sulfatider, langkædede fedtsyrer, langkædede galdesyrer, methylmalonsyre, porfyrstudier, screening af patienter med nedsat purin og pyrimidinmetabolisme.

    Eksempler på anvendelse af væskekromatografi
    i kombination med tandem massespektrometri i kliniske analyser.

    Screening af nyfødte: Det første eksempel på den massive anvendelse af HPLC-MS / MS i klinisk diagnose var screening af medfødte metaboliske fejl hos nyfødte. I øjeblikket i udviklede lande er dette en rutinemetode og dækker mere end 30 forskellige sygdomme, herunder acetademier, aminosyreopidier og fedtsyreoxidationsdefekter. Af særlig opmærksomhed er undersøgelser af fødselsdefekter, som kan føre til alvorlige problemer, hvis der ikke træffes umiddelbare foranstaltninger (for eksempel forstørret hjerte eller lever eller hjerneødem). Fordelen ved at anvende HPLC-MS / MS til screening af nyfødte er evnen til samtidig analyse af alle aminosyrer og acylcarnitiner i en hurtig, billig og meget specifik metode.

    Terapeutisk lægemiddelovervågning: Udviklingen og indførelsen af ​​det immunosuppressive sirolimus (rapamycin) for at forhindre organafstødning efter transplantation var et af de primære incitamenter til at indføre HPLC-MS / MS i kliniske laboratorier. Den nuværende HPLC-MS / MS-metode muliggør samtidig bestemmelse af tacrolimus, sirolimus, cyclosporin, everolimus og mycophensyre.

    HPLC-MS / MS bruges også til at analysere cytotoksiske, antiretrovirale lægemidler, tricykliske antidepressiva, antikonvulsive midler og andre lægemidler, der kræver individuel dosering.

    HPLC-MSMS-metoden tillader separation og kvantitativ bestemmelse af R- og S-enantiomerne af warfarin i koncentrationsområdet fra 0,1-500 ng / ml.

    Narkotiske og analgetiske stoffer: HPLC-MS / MS anvendes i vid udstrækning til analysen af ​​disse forbindelser på grund af enkelhed af prøvepræparationen og den korte analysetid. I øjeblikket anvendes metoden i kliniske laboratorier til screening for tilstedeværelsen af ​​en bred vifte af narkotiske stoffer. Metodenes unikke specificitet og følsomhed gør det muligt at samtidig analysere mere end 500 forbindelser af forskellige klasser i en prøve med minimal prøvepræparation. Så i tilfælde af urinanalyse er en simpel fortynding af prøven 50-100 gange tilstrækkelig. Ved analyse af hår, i stedet for et bundt på 100-200 hår, er et enkelt hår tilstrækkeligt til pålideligt at opdage fakta om narkotikamisbrug.

    Endokrinologi og steroidanalyse: HPLC-MS / MS anvendes meget i mange endokrinologilaboratorier til analyse af steroider - testosteron, cortisol, aldersteron, progesteron, østriol og mange andre.

    Flere og flere laboratorier begynder at bruge HPLC-MS / MS til at bestemme blodniveauerne af vitamin D3 og D2.

    I. Definition af steroider (steroidprofil).

    Laboratorier på hospitaler og klinikker er i øjeblikket i stand til at foretage samtidig bestemmelse af flere steroider ved hjælp af HPLC / MS / MS. Samtidig er der ikke behov for et stort prøvevolumen, hvilket er særligt vigtigt, når man analyserer børns prøver.

      Tilfælde, hvor det er tilrådeligt at bestemme flere (profilerende) steroider:

  • Medfødt adrenal hyperplasi (medfødt adrenal hyperplasi, CAH) er en medfødt defekt i steroids biosyntese. Dette er en arvelig gruppe af sygdomme forårsaget af uregelmæssig aktivitet af binyrebarkens enzymer, hvilket fører til et fald i produktionen af ​​cortisol. For en pålidelig diagnose af SAN anbefales det at bestemme cortisol, androstenedion og 17-hydroxyprogesteron. HPLC / MS / MS tillader præcis kvantitativ bestemmelse af alle tre steroider i en enkelt analyse med 100% nøjagtighed.
  • Rutinemæssig screening af nyfødte ved hjælp af immunoassays karakteriseres af et højt niveau af positive og falske negative resultater. HPLC / MS / MS-bestemmelsen af ​​ikke kun cortisol, men også aldosteron og 11-deoxycortisol gør det muligt at skelne primær insufficiens af binyrebarken fra sekundæret.
  • HPLC / MS / MS tillader bestemmelse af steroider for prostatitis og kronisk bækkenbetændelsessyndrom.
  • HPLC-MS / MS giver dig mulighed for at bestemme profilen af ​​steroider og identificere årsagerne til for tidlig pubertet forbundet med binyrene hos unge børn. Det blev konstateret, at koncentrationerne af testosteron, androstenedion, dehydroepiandrosteron (DHEA) og dets sulfat i disse børn var lidt højere end hos ældre børn i kontrolgruppen.
  • Blodserum hos aktive rygere, passive rygere og ikke-rygere analyseres for tilstedeværelsen af ​​15 steroidhormoner og thyroidhormoner for at undersøge forholdet mellem patienter udsat for røg og hormonkoncentrationer.
  • HPLC / MS / MS bruges til profilering af visse kvindelige steroidhormoner i urinen.
  • Ved anvendelse af HPLC / MS / MS blev koncentrationer af neuroaktive hormoner evalueret for at forhindre diabetisk neuropati.
  • II. Bestemmelse af skjoldbruskkirtelhormoner

    Rutinemæssige metoder til bestemmelse af skjoldbruskkirtelhormoner er sædvanligvis baseret på radioimmunoassay, hvilket er dyrt og tillader kun T3 og T4 at blive bestemt, hvilket kan begrænse evnen til at bestemme og fuldt ud kontrollere skjoldbruskkirtlens funktioner.

    • I øjeblikket udføres der ved hjælp af HPLC-MSMS en samtidig analyse i serumprøver af fem thyroidhormoner, herunder thyroxin (T4), 3,3 ', 5-triiodothyronin (T3), 3,3', 5'- (rT3), 3, 3'-diiodothyronin (3,3'-T2) og 3,5-diiodothyronin (3,5-T2) i koncentrationsområdet 1-500 ng / ml.
    • HPLC / MS / MS-metoden bruges også til at analysere sammensætningen af ​​hormonerne hos patienter, der gennemgår thyroidektomi. Koncentrationsniveauer af thyroxin (T4), triiodothyronin (T3), fri T4 og stimulerende thyroidhormon (TSH) efter kirurgi bestemmes. HPLC / MS / MS har vist sig at være en glimrende måde at fastslå forholdet mellem TSH og thyroidhormonkoncentrationer.
    • HPLC / MS / MS-metoden blev anvendt til at bestemme thyroxin (T4) i spyt og humant serum. Metoden er kendetegnet ved høj reproducerbarhed, nøjagtighed og detektionsgrænse på 25 pg / ml. Undersøgelser har vist, at der er et diagnostisk forhold i T4 koncentrationer i spyt mellem euthyroidfag og patienter med Graves 'sygdom.

    HPLC / MS / MS-metoden har i øjeblikket den følsomhed, specificitet og nøjagtighed, der er nødvendig for pålideligt at bestemme alle steroider i biologiske væsker og dermed øge diagnostiske evner, især i tilfælde af at bestemme steroidsæt.

    III. Bestemmelse af 25-oxyvitamin D ved HPLC / MS / MS

    25-hydroxy-vitamin D (25OD) er den vigtigste cirkulerende form for D-vitamin og forløberen af ​​dets aktive form. (1,25-dioxivitamin D). I betragtning af den lange halveringstid er bestemmelsen af ​​25OD vigtig for at bestemme status for vitamin D i patientens krop. D-vitamin findes i to former: vitamin D3 (cholecalciferol) og vitamin D2 (ergocalciferol). Begge former metaboliseres til de tilsvarende 25OD former. Tilgængeligheden af ​​analytiske metoder, der kan bestemme begge former for vitamin med høj nøjagtighed og tillade overvågning af patienter med nedsat D-vitamin, er meget vigtigt for diagnosen. De anvendte metoder hidtil tillader ikke separat bestemmelse af D2 og D3. Derudover undervurderes den påviselige mængde D3 ved høje koncentrationer af vitamin D2. En anden ulempe er anvendelsen af ​​radioaktive isotoper. Anvendelsen af ​​HPLC / MS / MS-metoden gjorde det muligt ikke kun at undgå anvendelse af radioaktive isotoper, men også at udføre den separate bestemmelse af begge aktive former af vitaminet.

        Metoden gælder for følgende patienter:

  • Hvis du har mistanke om et lavt indhold af D-vitamin i kroppen
  • Hvis en uforklarlig toksisk virkning mistænkes
  • Ved undersøgelse af patienter, der behandles med et lavt indhold af D-vitamin
  • Brugen af ​​HPLC / MS / MS tillod den separate bestemmelse af begge former under patientovervågning.
  • IV. Bestemmelse af immunosuppressiva med HPLC / MS / MS

    Efter organtransplantation er det nødvendigt at tage immunosuppressive stoffer gennem hele livet for at undgå afvisningsreaktionen. Med en meget smal terapeutisk rækkevidde og høj toksicitet kræver immunosuppressive midler individuel dosering for at opnå den maksimale effekt. Derfor er det vigtigt at overvåge de vigtigste immunosuppressive midler: cyclosporin A, tacrolimus, sirolimus og everolimus til at kontrollere dosis af lægemidler til hver enkelt patient afhængigt af koncentrationen af ​​lægemidlet i blodet.

    Immunoassay bruges stadig til at overvåge de listede lægemidler, men disse metoder er dyre, og deres specificitet, nøjagtighed og reproducerbarhed er begrænset. Der er tilfælde af død af patienter fra ukorrekt dosering af immunosuppressiva, baseret på resultaterne opnået ved hjælp af immunologiske metoder. I øjeblikket udskiftes immunoassays i kliniske laboratorier med HPLC / MS / MS. Således analyseres ca. 70 prøver dagligt ved University of Munich Clinic for indholdet af sirolimus og cyclosporin A ved anvendelse af et HPLC / MS / MS-system. Alt prøveudarbejdelse og kontrol af enheden udføres af en medarbejder. Laboratoriet bytter også til takrolimusanalyse ved denne metode.

    • Anvendelsen af ​​HPLC / MS / MS til rutinemæssig samtidig bestemmelse af tacrolimus, sirolimus, ascomycin, demetiksisirolimus, cyclosporin A og cyclosporin G i blodet er blevet beskrevet. Intervallet bestemmes af koncentrationen 1,0 - 80,0 ng / ml. For cyclosporin 25 - 2000 ng / ml. I løbet af året blev der analyseret mere end 50.000 prøver i laboratoriet.
    • Da det blev konstateret, at samtidig anvendelse af tacrolimus og sirolimus har en positiv terapeutisk effekt, blev der udviklet en simpel og effektiv HPLC / MS / MS-metode til deres separate bestemmelse i blod til kliniske analyser. Analysen af ​​en prøve tager 2,5 minutter med en nøjagtighed på 2,46% - 7,04% for tacrolimus og 5,22% - 8,30% for sirolimus for hele analysekurven. Den nedre grænse for takrolimusbestemmelse er 0,52 ng / ml, sirolimus - 0,47 ng / ml.

    V. Bestemmelse af homocystein ved HPLC / MS / MS

    Homocystein er af interesse for hjerte-kar-sygdomme (tromboembolisme, hjertesygdom, aterosklerose) og andre kliniske tilstande (depression, Alzheimers sygdom, osteoporose, komplikationer under graviditet osv.). Eksisterende homocysteinanalyser, herunder immunoassays, er dyre. En hurtig HPLC / MS / MS-metode er blevet udviklet til analyse af homocystein til rutinemæssig klinisk anvendelse, når der analyseres et stort antal prøver. Ionisering blev udført ved elektrospraymetoden. Metoden er reproducerbar, meget specifik og præcis. Fordelene ved fremgangsmåden er også lave omkostninger ved reagenser og lethed af prøvefremstilling. Det er muligt at analysere 500 eller flere prøver pr. Dag.

    konklusion

    Det skal bemærkes, at selv om væsentlige forbedrede immunanalysemetoder i øjeblikket anvendes på grund af tekniske grundlæggende begrænsninger, vil denne metode aldrig have en præcision og specificitet for målstoffet, der kan sammenlignes med HPLC-MSMS, især i nærværelse af metabolitter. Dette medfører ikke kun en lav nøjagtighed af ELISA-metoden og en høj procentdel af falsk-positive og falsk-negative resultater, men tillader heller ikke at sammenligne resultaterne opnået i forskellige kliniske afdelinger ved hjælp af ELISA-metoden. Brugen af ​​HPLC-MS / MS eliminerer denne ulempe, giver mulighed for meget specifik, præcis og hurtig analyse af et stort antal prøver med stor tillid til forekomsten af ​​metabolitter og i fravær af interferens fra beslægtede og endogene stoffer i plasma og blod hos patienter.

    På trods af den tilsyneladende høje pris for instrumentkomplekset, som verdenspraksis viser, med korrekt drift, betaler dette kompleks i 1-2 år. Dette skyldes primært de lave omkostninger ved en analyse på grund af den samtidige analyse af tiere og hundredvis af forbindelser og fraværet af behovet for at købe dyre diagnostiske kits. Desuden har laboratoriet mulighed for selvstændigt at udvikle alle nødvendige analysemetoder og ikke at afhænge af fabrikanten af ​​kittene.

    Valg af den rigtige konfiguration af instrumentkomplekset

    Der findes et stort antal forskellige metoder til massespektrometri og typer af massespektrometre, der er designet til at løse en lang række opgaver - fra strukturel identifikation af komplekse proteinmacromolekyler, der vejer hundredtusindvis af Daltons til den rutinemæssige højtydende kvantitative analyse af små molekyler.

    For at kunne udføre opgaven er en af ​​de grundlæggende betingelser valget af den rigtige type udstyr. Der er ingen universel enhed, der gør det muligt at løse hele spektret af analytiske opgaver. Således er en indretning, der er designet til at løse problemet med at identificere mikroorganismer, ikke i stand til at foretage kvantitativ analyse af små molekyler. Og omvendt. Faktum er, at det på trods af det fælles navn er helt forskellige enheder, der arbejder på forskellige fysiske principper. I det første tilfælde er dette et tidsspidsmassespektrometer med en laser ioniseringskilde, MALDI-TOF, og i den anden en triple quadrupole med elektrosprayionisering, HPLC-MSMS.

    Den næststørste parameter er valget af den korrekte systemkonfiguration. Der er flere større producenter af massespektrometriudstyr. Hver fabrikants enheder har ikke kun deres egne styrker, men også svagheder, som de normalt foretrækker at holde sig tavse om. Hver producent fremstiller sin egen linje af enheder. Omkostningerne ved et analytisk kompleks er i størrelsesordenen $ 100.000 til 1.000.000 eller flere dollars. Valget af den optimale producent og den korrekte konfiguration af udstyret vil ikke blot spare betydelige økonomiske ressourcer, men også mere effektivt løse opgaven. Desværre er der mange eksempler, hvor laboratoriet var udstyret uden hensyntagen til disse faktorer. Resultatet - inaktivt udstyr, spildt penge.

    Den tredje faktor, der bestemmer laboratoriets succes er personalet. Massespektrometre kræver højt kvalificeret personale. Desværre har ikke et enkelt universitet i Rusland et kursus i moderne praktisk massespektrometri, især i forhold til kliniske applikationer, og opgaven med at uddanne medarbejderne på hvert laboratorium skal løses alene. Selvfølgelig er 2-3 dages efteruddannelsestræning foretaget af producenten efter lanceringen af ​​udstyret helt ufuldstændig for at forstå det grundlæggende i metoden og erhverve færdigheder i enheden.

    Den fjerde faktor er manglen på færdige analysemetoder. Hvert laboratorium har sine egne prioriteter, som det er nødvendigt at udvikle deres egne metoder. Dette kan gøres af en person med mindst 2-3 års erfaring i enheden. Producentvirksomheder leverer undertiden en eller to generelle metoder af anbefalende karakter, men tilpasser dem ikke til laboratorieopgaverne.

    I "BioPharmEkspert" LLC er der specialister med mange års erfaring inden for forskellige typer massespektrometre, samt udvikling af metoder og formulering af højtydende analyser. Derfor leverer vi følgende tjenester:

    1. Valg af enhedens optimale konfiguration til specifikke kundeopgaver.
    2. Indkøb, levering og igangsætning af udstyr fra førende producenter af tandem massespektrometre. Gradvis uddannelse af personale inden for et år fra det øjeblik, hvor udstyret startes.
    3. Et sæt færdige metoder og databaser til løsning af grundlæggende kliniske problemer.
    4. Udvikling af analysemetoder og løsning af specifikke opgaver hos klienten i hans laboratorium med involvering af hans personale.
    5. Metodisk støtte på alle stadier af arbejdet.

    Blodanalyse med foreløbig derivatisering (TMS-derivater)

    Tvådimensionel gaskromatografi - Massetids-spektrometri for plasma-analyse med foreløbig derivatisering (TMS-derivater), der viser bestemmelsen af ​​glucose 5TMS

    Analysen af ​​blodplasma-metabolitter ved hjælp af todimensionel gaschromatografi-time-of-flight massespektrometri med foreløbig derivatisering (TMS-derivater) demonstrerer påvisningen af ​​5TMS glucose med en tilfældighedsgrad på 901.